服务介绍：

Exosome 分离纯化试剂盒

货号：EX030

原理与方法:

Exosome 分离纯化试剂盒是上海歌凡生物研发的针对细胞培养上清液、尿液、脑脊液、羊水等体液样品分离纯化 exosome 的试剂盒。用此试剂盒能高效获取此体液中高纯度的exosome，并可用于exosome后续细胞功能、RNA和蛋白质的研究。

试剂盒组成：

保存条件：

4℃保存。

血清样品收集

用采血针和普通血清管（不含任何试剂，10ml规格）采血10ml。室温静置30mln，然后4℃条件下，静置3-4小时（此时可见血快析出）。用移液器吸取上面的淡黄色血清（应该有4ml左右）转入15ml离心管中，4℃条件下3000g离心15min，小心取上清转入15ml离心管中，最大程度保证血清质量。离心后的血清15分钟内冻存于-80℃冰箱。

血浆样品（不能用肝素抗凝）收集

1、 用采血针和EDTA抗凝管抽取全血，轻柔混匀后室温或者4℃保存，并在1小时内进行下一步处理。

2、 4℃条件下，使用吊桶式转头1900g离心10min，小心吸取上清即为血浆，最后500ul左右丢弃。得到的血浆再次离心，条件为4℃，3000g，15min，小心吸取血浆，注意不要碰到底部和侧面的沉淀物。

3、 将血浆冻存于-80℃。提示：送样最好4ml以上（分离4ml血浆约需要8-10ml全血）。

血清血浆样本收集注意事项：

1. 空腹采血；

2. 病人采血时要对病人的姓名、年龄、身高、体重、血糖、血脂做记录，对血脂特别高或者血糖特别高的标本要做特殊标记；

3. 剔除有溶血的标本；

4. 样本标记要简单清晰；

5. 取好的血清血浆标本要用封口膜封口后放-80℃冻存，避免反复冻融！

Exosome 分离纯化步骤

1、 取出血清或血浆样本，恢复到室温，并4℃3000gx20min离心，取上清，去除大分子蛋白及组织碎片；

2、 0.22um滤器过滤；

3、 取1ml样品转移至一个无菌的新的EP管中，加入exosome 分离纯化溶液0.2ml，用移液枪充分混匀，4℃混匀过夜或>14小时；

4、 1500gx30min，4℃离心；

5、 吸除上清液后，再1500gX5min，4℃离心，去除残余溶液；

6、 加50ul无菌PBS或去离子水重悬混匀exosome沉淀；

7、 重悬exosome，4℃可短期保存，-20℃可长期保存；

结果与观察

Exosome为半托杯状结构，粒径范围多在20-200nm.

注意事项：

1、 本试剂可室温保存，4℃保存也可。

2、 本品仅限用于科研实验。

3、 做少量WB实验一般10ml细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离exosome做rna或蛋白质分析，我们推荐使用大于50ml样本量来分离exosome。

4、 分离exosome可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA或蛋白质或1:100PBS稀释行粒径检测；

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