服务介绍：

Exosome 分离纯化试剂盒

货号：EX050C

原理与方法:

MU exosome 分离纯化试剂盒是上海歌凡生物研发的针对细胞培养上清液、尿液、脑脊液、羊水等体液样品分离纯化 exosome 的试剂盒。用此试剂盒能高效获取此体液中高纯度的exosome，并可用于exosome后续细胞功能、RNA和蛋白质的研究。

试剂盒组成：

保存条件：

4℃保存。

Exosome 分离纯化步骤：

1、 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定的时间，贴壁细胞密度在70%-80%，悬浮细胞密度在60%-70%。对于贴壁细胞，去除原有培养基，换成新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300g，4℃，10min收集细胞。使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间。

2、 收集细胞上清，300g，4℃，离心10min；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片。

3、 收集细胞培养上清液或尿液等样品，并3000gx20min，4℃离心，取上清，去除细胞和细胞碎片；

4、 0.22um滤器过滤；

5、 取1ml细胞培养上清液或尿液等样品转移至一个无菌的新的EP管中，加入exosome 分离纯化溶液0.2ml，用移液枪充分混匀，4℃混匀过夜或>14小时；

6、 1500gx30min，4℃离心；

7、 吸除上清液后，再1500gX5min，4℃离心，去除残余溶液；

8、 加50ul无菌PBS或去离子水重悬混匀exosome沉淀；

9、 重悬exosome，4℃可短期保存，-20℃可长期保存；

结果与观察

Exosome为半托杯状结构，粒径范围多在20-200nm.

注意事项：

1、 本试剂可室温保存，4℃保存也可。

2、 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片（重要！），合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4℃短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80℃。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。提示：细胞培养液上清送样量最好50ml以上（建议具备相应实验条件的老师，在送样前对细胞上清进行超滤，将体积浓缩到10ml左右以提高外泌体的浓度，降低后续实验风险）。

3、 本品仅限用于科研实验。

4、 做少量WB实验一般10ml细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离exosome做rna或蛋白质分析，我们推荐使用大于50ml样本量来分离exosome。

5、 分离exosome可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA或蛋白质或1:100PBS稀释行粒径检测；

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