服务介绍：

Exosome 分离纯化试剂盒

货号：EX050T

原理与方法:

Exosome 分离纯化试剂盒是上海歌凡生物研发的针对细胞培养上清液、尿液、脑脊液、羊水等体液样品分离纯化 exosome 的试剂盒。用此试剂盒能高效获取此体液中高纯度的exosome，并可用于exosome后续细胞功能、RNA和蛋白质的研究。

试剂盒组成：

保存条件：

4℃保存。

组织样本处理方法

新鲜离体组织块（大小5mg）用无菌的冰PBS清洗，洗去血渍及其他组织液。然后放在加有5ml无血清的RPMI培养基的培养皿上，用眼科剪把组织块剪成芝麻粒大小的小块，放37℃培养箱培养12-24h.用吸管小心吸取培养液，4℃800g离心10min，收集上清，再4℃20000g离心去掉细胞碎片，用无菌的EP管收集上清液（同一标本可以多做几个平行样，然后统一收集上清液，以提高exosome收集量），4℃或-80℃保存。

Exosome 分离纯化步骤

1、 取出组织培养的上清液样本，恢复到室温，并3000gx20min，4℃离心，取上清，去除大分子蛋白及组织碎片；

2、 0.22um滤器过滤；

3、 取1ml样品转移至一个无菌的新的EP管中，加入exosome 分离纯化溶液0.2ml，用移液枪充分混匀，4℃混匀过夜或>14小时；

4、 1500gx30min，4℃离心；

5、 吸除上清液后，再1500gX5min，4℃离心，去除残余溶液；

6、 加50ul无菌PBS或去离子水重悬混匀exosome沉淀；

7、 重悬exosome，4℃可短期保存，-20℃可长期保存；

结果与观察

Exosome为半托杯状结构，粒径范围多在20-200nm.

注意事项：

1、 本试剂可室温保存，4℃保存也可。

2、 本品仅限用于科研实验。

3、 做少量WB实验一般1ml细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离exosome做rna或蛋白质分析，我们推荐使用大于10ml样本量来分离exosome。

4、 分离exosome可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA或蛋白质或1:100PBS稀释行粒径检测；

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