服务介绍：

AKP(碱性磷酸酶)改良钙钴法染色试剂盒

货号M039

原   理:

此法选用镁离子（Mg⁺⁺）做激活剂，以β-甘油磷酸钠做底物，在pH值9.4时，β-甘油磷酸钠被水解为甘油和磷酸，释放出来的磷酸为高浓度的钙盐所捕获，形成无色的磷酸钙。磷酸钙再与硝酸钴作用，变成不溶解的磷酸钴。磷酸钴无色，但经与硫化铵作用即成为黑色不溶性的硫化钴。故有黑色硫化钴存在的部位，即证明有碱性磷酸酶活性的存在，而根据其黑色的深浅程度又可估计此酶的活性强弱。

组织固定与包埋：

1. 取薄片组织置于4℃冰箱中冷丙酮内固定18-24h(固定4-6h后更换一次新的冷丙酮)

2. 入无水乙醇ⅠⅡ各30min；

3. 入无水乙醇二甲苯等量混合液30min；二甲苯ⅠⅡ各30min；

4. 以52-54℃石蜡于56℃烘箱内浸蜡ⅠⅡ各30min；

5. 石蜡包埋。

保存条件:

4℃保存，半年有效。

试剂盒组成:

实验流程：

1. 新鲜组织冰冻切片6-8um或者石蜡切片经脱蜡至水洗；

2. 放入孵育液中置于37℃温箱内孵育。冰冻切片10-30min，石蜡切片1-2h（阴性对照片用阴性对照孵育液）；

3. 蒸馏水稍洗；

4. 入硝酸钴水溶液处理2-5min；

5. 蒸馏水速洗一次；

6. 入硫化铵溶液处理1-2min；

7. 流水冲洗5min；

8. 冰冻切片用甘油明胶固定；石蜡切片常规脱水、透明及封固。

染色结果：

   碱性磷酸酶活性处呈黑色或棕黑色。

注意事项：

1. 每次实验都要有阴性对照片；

2. 组织固定必须在4℃冰箱中进行，且不超过24h，否则酶活性降低，甚至酶活性消失；

3. 硫化铵溶液每次使用时应新鲜配制，如需再用可重新配制。配制比例硫化铵:水溶液为1:100体积比，用多少配多少。

4. 孵育液要放4℃冰箱保存，用前取出，并提前放入温箱使之达到374℃，然后再把切片放入孵育，孵育后放回冰箱，此液可以使用数次。

说明书下载