服务介绍：

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色

货号：M071

原理:

TRAP染色反应 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶，应用偶氮偶联组化分析法酶活性部位显示红色反应。以萘酚二磷酸盐为底物，偶氮副品红为显色剂，TRAP在酒石酸钾钠存在条件下将萘酚AS-BI磷酸盐水解为萘酚AS-BI，与显色剂结合形成红色沉淀。

骨组织中的破骨细胞分泌酒石酸抵抗的酸性磷酸酶，用此方法可以显示骨组织中破骨细胞的活性。本试剂盒适用于骨组织的石蜡切片、冰冻切片及培养的破骨细胞。

组织固定:

建议用80%酒精固定；福尔马林或者4%多聚甲醛固定时间16小时到4天，4℃下进行。也可以用切片前不固定，用2.5%戊二醛二次固定10分钟。

试剂盒组成:

操作步骤

1. 石蜡切片4～5um,脱蜡至水洗；细胞爬片或者冰冻切片用80%酒精或戊二醛固定后蒸馏水水洗3次，每次3分钟。

2. 配制六偶氮副品红溶液（亚硝酸钠溶液和副品红溶液等比例混合，即为六偶氮副品红，现配现用）

3. 配制孵育液：取1ml六偶氮副品红加到18ml醋酸盐溶中，再加入1ml萘酚AS-BI磷酸盐溶液，再加酒石酸钾钠282mg。调pH值5.0，过滤备用；

4. 阴性对照孵育液：取1ml六偶氮副品红加到18ml醋酸盐溶中，再加酒石酸钾钠282mg。调pH值5.0，过滤备用

5. 切片入37℃蒸馏水水洗30秒；

6. 入孵育液37℃孵育50-60分钟；

7. 去离子水水洗3分钟；

8. 入苏木素复染40秒；

9. 自来水水洗10分钟返蓝；

10. 甘油明胶封片。

结果分析:

破骨细胞桨呈紫红色，细胞核呈蓝色。

体会与说明:

1. 骨组织切片易脱片，操作过程中水洗要轻；

2. 骨组织脱钙宜用柠檬酸脱钙或者EDTA脱钙，禁用强酸脱钙；

3. 切片以3-4um为宜，切片过厚就会有酶扩散现象；

4. 孵育液要新鲜配制，现用现配；pH值对染色影响比较大，pH值5.0为最佳；

5. 37℃孵育时要防止水分蒸发，染色液干凅。

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