服务介绍：

吖啶橙溴乙锭荧光染色法

货号：M086

原理：

吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭(EB仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者形态迥然相异，很易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。

试剂盒组成：

保存条件：

-20℃避光保存。

使用说明：

本试剂盒可以适用口腔黏膜上皮细胞临时制片、细胞爬片、冰冻切片等标本。

使用前将吖啶橙染色液和溴乙锭染色液等量混合（一般100ul细胞悬液加4ul混合液即可；涂片。细胞爬片、冰冻切片也可以用混合液100倍稀释液染色）

（1）取处理好的口腔黏膜上皮细胞涂片、细胞爬片、冰冻切片。

（2）95%乙醇溶液固定5min。

（3）滴加吖啶橙溴乙锭工作液染色2min。

（4）盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。

结果与观察

荧光显微镜：WIB，光是蓝色的那个镜下观察.活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。注意事项：

1、每种荧光染料，均有自己的最适pH，此时荧光最强。当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH缓冲液中进行。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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